由于常规糖类化合物在紫外光波长范围没有吸收,即没有吸光基团,常规紫外检测器在糖类化合物分析中的应用罕有报道。壳寡糖作为自然界中唯一带正电荷的碱性寡糖,其杂环结构中同时含有羟基和氨基,基于分子轨道理论,紫外照射会引起孤对n电子向单键σ电子发生能级跃迁,可以诱发壳寡糖在波长200nm附近产生一定吸收。实验基于紫外光可诱发壳寡糖电子能级跃迁的原理,在紫外检测器波长200nm条件下,分析比较Shodex 色谱柱(氨基修饰填料)和TOSOH色谱柱(酰胺基修饰填料)对壳寡糖混合标准样品的分离效果,并与 示差折光检测器(RID)条件进行比较,验证紫外检测器在壳寡糖分析检测中的应用可行性。
两种色谱条件下氨基葡萄糖的色谱图
采用Shodex色谱柱时,氨基葡萄糖的保留时间较短,即与树脂固定相的作用力弱于其在TOSOH 色谱柱的情况,且DAD和RID所得峰形接近,分离度优于TOSOH色谱柱,对于聚合度10以下的壳寡糖样品,可以在更短时间内完成分析检测。因此试验优选Shodex色谱柱。基于Shodex氨基柱,在紫外检测器条件下氨基葡萄糖定量计算的标准曲线,开发并验证了壳寡糖定性定量的分析方法,不同聚合度壳寡糖的分离程度和色谱峰分布规律与示差折光检测器的检测效果相当,并以此确定了壳寡糖混合标准样品的聚合度分布。方法可作为现行壳寡糖行业标准检测方法的有效补充。
文章源自周卫强《基于紫外检测器的壳寡糖色谱分析与比较》
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