壳寡糖聚合度检测方法

发布时间：2018-05-17 15:44:50

  壳寡糖的功能和其聚合度有着密切的关系，目前常见的检测壳寡糖聚合度的方法有以下几种。

  1、 TLC：薄层色谱

  将壳寡糖用蒸馏水配成1mg/ml的溶液，取样品于薄层板上，展开剂：正丙醇/水/氨水=6/3/1（V/V）；显色剂：苯胺/二苯胺；

此方法简单，容易操作，适合聚合度8以下的寡糖。

  2、 PAGE：聚丙烯酰胺凝胶电泳

  取处理好的壳寡糖样品10ul上样。恒压400V电泳1h后1000V电泳直到ANTS前沿接近凝胶底部。电泳过程采用循环水冷却系统保持电泳槽温度4-7℃,染色剂染色后于紫外透射光（365nm）下拍照保存。

此方法需要专门的制备凝胶设备和电泳设备，步骤较为繁琐，条件不容易控制，但适合的聚合度较为宽泛，适合聚合度20以下的寡糖，比TLC应用范围广。

  3、 HPLC：高效液相色谱

  将壳寡糖用蒸馏水配成5mg/ml的溶液，过0.22um滤膜，用HPLC进行检测。色谱条件：色谱柱Shodex NH2 P 50 4E (4.6mm×250mm)；流动相：A水、B乙腈；检测器：蒸发光散射检测器。

此方法需要专业的高效液相色谱设备和色谱柱，需要专业的操作人员，分辨率高于其他色谱法，可重复性高，自动化操作，分析精度高。

  4、 电喷雾质谱（ESI-MS）分析

将壳寡糖配成0.1mg/ml的溶液，加入同等体积的乙腈，注射泵直接进样，样品流速10μL/min。。检测仪器：美国Thermo Scientific LTQ Orbitrap XL质谱仪；检测条件：正离子检测模式，喷雾电压(Spray voltage)3.0kV，透镜电压(Tube lens)80V，毛细管温度(Capillary temp)275℃，毛细管电压(Capillary voltage)43V，鞘流气体流速(Sheath gas flow rate)8arb。 

  此方法需要专业的质谱仪，需要专业人员操作，可重复性高，自动化操作，分析精度高。