壳寡糖的检测分析方法简介

发布时间：2022-12-09 14:36:34

1、比色法

比色法是定量分析壳寡糖含量和性质时常用的化学方法，主要包括乙酰丙酮法测平均分子量、3,5－二硝基水杨酸（DNS）测还原性糖含量、蒽酮硫酸法或苯酚硫酸法测总糖含量等。通过对壳寡糖进行酸水解，Elson－morgan法和DNS法亦可用于测定壳寡糖总糖含量。有研究表明，苯酚硫酸法和DNS法都能到简便快速的测量得出壳寡糖总糖含量，但该类方法对壳寡糖检测的灵敏度较低，不能用于壳寡糖混合物间各组分的定性定量分析。

2、薄层色谱分析

薄层色谱（TLC）是一种定性分析不同聚合度壳寡糖的简便有效手段。薄层色谱具有灵敏度高、便于操作的特点，低聚合度的壳寡糖能够在薄层板上实现良好的分离，可用于观察壳寡糖单体分布情况，但缺乏有效的定量方式，使得薄层色谱分析方法的应用受到限制。

3、质谱分析

质谱技术（MS）可以精确地测定样品的分子量，并可应用于单一聚合的壳寡糖含量和分布测定，其中较为常见的是基质辅助激光解析电离飞行时间质谱和电喷雾电离质谱。飞行时间质谱的结构包括飞行时间质量检测器和基质辅助激光解吸电离离子源。在质谱图中给出的离子峰能与壳寡糖混合物中每一个单体的质荷比m/z对应，正离子模式包括［M+H］+、［M+K］＋、［M＋Na］+、［M+NH4］+，负离子模式有［M+Cl］-。

4、红外光谱

红外光谱法（IR）在鉴定高分子化合物官能团的应用极为广泛，其每一个峰值都能体现分子中不同原子或官能团的振动情况，显示结构的变化。研究表明壳寡糖的红外光谱图中的吸收峰与壳聚糖的吸收峰几乎是相同的。红外吸收谱带主要集中在3480cm-１到685cm-１峰值之间。在890cm-１附近的是结构的环伸缩振动，1000-1200cm-１对应C－O－C基团的伸缩振动，1310-1320cm-１内表明存在酰胺III谱带，而1550cm-１处对应的是酰胺II谱带，1650cm-１附近存在的特征峰则是酰胺I谱带，有C=O基团的伸缩振动，2840-2962cm-１区间里的特征峰形可分别对应CH、CH2、CH3振动，3264cm-１处对应NH的伸缩振动，3450cm-１处对应的是OH伸缩振动。

5、核磁共振波谱法

核磁共振波谱法（NMR）是一种重要的壳寡糖表征手段，它能够对壳寡糖的化学结构变化进行细微地表征。在核磁谱图中可以体现出壳寡糖聚合度和乙酰度的变化。

6、高效液相色谱法

液相色谱法是对壳寡糖进行组分分析最常用的技术手段，具有方便、快速、分离效果好、分辨率高、重现性好和不破坏样品等优点，该方法必须有标准品作参照。分析壳寡糖常用的液相色谱方法主要有高效液相色谱（HPLC）和高效凝胶排阻色谱（HPSEC）。高效液相色谱主要用于聚合度低的壳寡糖，灵敏度高，分析时间短。Shodex NH2P504E氨基柱是目前检测壳寡糖效果较佳的色谱柱，由于氨基柱是用高分子材料键合氨基基团，在酸性或中性条件下带正电，而壳寡糖自身的氨基也带正电，从而之间存在排斥力使得样品不易在氨基柱上保留，使得具有很好的分离效果。