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壳寡糖对秋海棠叶片离体培养的影响

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1、不同处理对外植体诱导分化的影响

将灭过菌的秋海棠叶片剪切后分别接种到5种培养基中,培养10 d后,秋海棠叶片逐渐增厚、卷曲,并在切口处可见到明显的组织膨大和一些红色的小突起,逐渐形成愈伤组织。一般来说,薄壁细胞分化水平较低,有较大发育的可塑性,由于秋海棠叶片叶肉细胞含有完整的薄壁细胞组织,因此较容易诱导出愈伤组织。每种供试培养基均可诱导形成愈伤组织,但诱导率有一定差异。由表1可知,以2,4-D为激素的对照培养基对秋海棠叶片愈伤组织的诱导效果最好。壳寡糖对秋海棠叶片愈伤组织的诱导也有影响,可作为一种生长调节物质促进外植体诱导分化,其中以MS+COS 1.5 mg/L对秋海棠叶片愈伤组织的诱导效果最好。

在愈伤组织形成后14~21 d,可观察到叶片切口处的红色小突起大多数分化成密集的不定芽,这些芽体在30 d左右会长满整个培养瓶。然而在培养过程中有些外植体会产生褐变,特别是愈伤组织形成以后,褐变的外植体会逐渐增多,且只产生少量的芽体,从而影响到组织培养的效果。由表1可知,以MS+2,4-D 1.5 mg/L对不定芽的分化效果最好,不仅芽的分化速度快,数量和长势也是最好的。以壳寡糖为添加物的培养基中MS+壳寡糖2.0 mg/L的分化效果较好。虽然壳寡糖对不定芽分化的影响不如2,4-D,但是对外植体褐变的控制效果却明显高于2,4-D,高浓度壳寡糖可以很好地控制外植体褐变的产生。壳寡糖可以抑制PPO的活性,延缓

外植体的褐变,培养基中壳寡糖浓度在0.5~2.0 mg/L范围内,对外植体褐变抑制效应随浓度的升高而增强。

2、不同处理对秋海棠继代增殖和芽苗生长的影响

将带有不定芽的愈伤组织切成小块,转入新的培养基中进行继代培养,7 d后,芽的基部开始形成3~15个丛生芽,同时愈伤组织也将形成大量的不定芽。由表2可知,对照培养基MS+2,4-D 1.5 mg/L继代培养的效果最好。壳寡糖的效果比2,4-D差些,但也对秋海棠的不定芽增殖有影响,其中MS+COS 2.0 mg/L稍好于MS+COS 1.5 mg/L。不定芽接种到新鲜培养基后,将继续生长分化。丛生芽分化的速度和数量还是2,4-D效果最好,但丛生芽分化速度过快,数量过多,造成

新生成的芽体细弱,不利于后面的组织培养。所以综合比较,以MS+COS 1.5 mg/L培养基对丛生芽生长的效果较好。

3、不同处理对秋海棠芽苗生根的影响

将高2~3 cm生长健壮的丛生芽单个切下,转入不同的新鲜培养基中进行生根培养。7 d后丛生芽上逐渐出现白色锥状突起,即生根现象发生。不同培养基对生根的诱导效果不同。由表3可见,对照培养基MS+2,4-D 1.5 mg/L诱导生根的效果最好,其诱导生根率高达90%,生根最长,数量最多,时间最短,生长状态最优;以壳寡糖为添加物的培养基对生根诱导也有促进作用,在0.5~2.0 mg/L的浓度范围内,对芽苗生根的诱导能力随浓度的增加而加强。

4、结论

秋海棠组织培养时,在MS培养基中加入壳寡糖可起到促进外植体生长分化的作用。试验表明,壳寡糖在这方面的影响弱于2,4-D,是由于2,4-D是一种强力的生长调节物质,而壳寡糖对植物所起的主要作用却并不在此,所以二者在促进植物生长分化方面的作用并不存在可比性,2,4-D在该试验中仅起到一个参照的作用,所以在此笔者仅对不同壳寡糖浓度对组织培养的影响做出讨论。试验表明,壳寡糖在秋海棠叶片培养中可起到生长激素的作用,最适合诱导愈伤组织的培养基是MS+COS 1.5mg/L;对秋海棠继代增殖和不定芽分化效果最好的培养基MS+COS 1.5 mg/L和MS+COS 2.0 mg/L;生根培养中,诱导生根效果最好的培养基为MS+COS 1.5 mg/L;组培苗的移栽,则以用浓度0.75%~1.0%的壳寡糖溶液浇灌的幼苗成活率最高。

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