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壳寡糖和壳聚糖分子量的测定方法

目前用于壳寡糖和壳聚糖分子量的常用方法主要有光散射法、粘度法、端基分析法和凝胶渗透色谱法。

1、 光散射法(LLS)

光散射法是一种测定聚合物绝对分子量的重要方法,测定原理主要是依据光在聚合物溶液中的丁铎尔效应。该方法能测定聚合物分子量范围较其他方法宽,有文献报道为104—107KDa。Kasaai等以0.25mol/L HAc-NaAc溶液为壳聚糖溶剂,测定了壳聚糖样品的相对重均分子量MW。在实际应用中,由于仪器价格昂贵使得其应用范围受到了很大限制。

2、 凝胶渗透色谱法

实验室中一般采用凝胶渗透色谱法,如HPLC法,该方法既能给出分子量值,还能提供分子量的分布情况,但它给出的分子量是相对值,需采用标准品校准柱系后才能得到准确的结果。通常所使用的标准品为葡聚糖、支链淀粉等。

3、 端基法

端基法是测定低分子量壳聚糖平均分子量的常用方法。其原理主要是壳聚糖分子链端的半缩醛基与显色剂铁氰化钾反应,生产无色的亚铁氰化钾,在特定波长下吸光度的减少值与壳聚糖浓度呈正比关系。在用端基法测定分子量时,要用到与待测样品结构上相似的参比物,这可使它们在化学性质上更为接近。

4、 粘度法

特性粘度法是一种测定壳聚糖相对分子量的常用方法,即通过测定样品在一定条件(如温度、缓冲液、离子强度等)下特性粘度η来计算得到相对分子量。

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